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技術(shù)應(yīng)用
SMART技術(shù)是利用逆轉(zhuǎn)錄酶內(nèi)源的末端轉(zhuǎn)移酶活性，只需少量的Total RNA就可得到高質(zhì)量、高產(chǎn)量的cDNA文庫(kù)，更重要的是得到的cDNA能夠代表原有樣品中的mRNA的豐度，可以應(yīng)用于直接擴(kuò)增基因、構(gòu)建cDNA文庫(kù)、已知序列釣全長(zhǎng)cDNA以及用于芯片檢測(cè)探針的擴(kuò)增等。
技術(shù)原理
SMART (Switching Mechanism At 5'end of the RNA Transcript)技術(shù)是在合成cDNA的反應(yīng)中通過(guò)使用3'末端帶Oligo(dG)的引物,在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下以mRNA為模板合成cDNA的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。其利用真核mRNA 的5'未端特有的“帽子結(jié)構(gòu)”,使用SMART引物的Oligo(dG)與合成cDNA末端配對(duì)后形成cDNA的延伸模板,逆轉(zhuǎn)錄酶會(huì)自動(dòng)轉(zhuǎn)換模板，繼續(xù)延伸cDNA單鏈直到引物的末端，并通過(guò)RT-PCR合成第二鏈獲得dS-cDNA。由于有5'帽子結(jié)構(gòu)的mRNA才能利用這個(gè)反應(yīng)得到能擴(kuò)增的cDNA，因此擴(kuò)增得到的cDNA就是全長(zhǎng)cDNA。
服務(wù)流程
客戶提交實(shí)驗(yàn)材料詳細(xì)信息(建庫(kù)組織樣品或總RNA，候選蛋白序列信息)—總RNA提取cDNA合成及載體重組—轉(zhuǎn)化大腸桿菌或酵母菌制備文庫(kù)—文庫(kù)質(zhì)量檢測(cè)及質(zhì)粒提取—誘餌菌株自激活檢測(cè)及互作篩選—數(shù)據(jù)采集及處理并撰寫(xiě)提交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
交付內(nèi)容
（1）提供足量的大腸文庫(kù)甘油菌和文庫(kù)質(zhì)粒或者酵母文庫(kù)甘油菌(文庫(kù)容量>1x107 CFU、陽(yáng)性率>95%)；
（2）詳細(xì)的word電子版實(shí)驗(yàn)報(bào)告(含原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù))；
（3）陽(yáng)性克隆測(cè)序結(jié)果。
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